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英文名称：MuSK-Ab ELISA
产品规格：96T
musk试剂盒预期用途
musk试剂盒可定性和定量检测人血清中抗骨骼肌受体酪氨酸激酶自身抗体。仅用于科研使用。
前言简介
重症肌无力（MG）是由于自身抗体作用使神经肌肉传递失败而导致的。大约80—90%的广义MG病人均有肌肉烟碱型乙酰胆碱受体的自身抗体。这些抗体会导致乙酰胆碱受体数量减少和功能的丧失，并导致神经肌肉传递失败—肌无力。10—20%的广义重症肌无力病人和多达50%的眼肌型重症肌无力患者无法检测到乙酰胆碱受体抗体。这种情况通常被称为血清反应阴性的重症肌无力。血清反应阴性的重症肌无力已被认为是一种抗体介导的疾病。
骨骼肌特异性受体酪氨酸激酶抗体（MuSK-Ab）已证实存在于广义的血清反应阴性的重症肌无力病人的血清中（大约40%血清反应阴性的MG病人）。MuSK是一种集聚蛋白受体复合物的一部分并且在突触形成过程中诱导乙酸胆碱受体的聚集，而且Musk也在成熟神经肌肉接点（NMJ）表达。华南生物工程有限公司Musk MG病人大多数为女性，有显著的头颅和累及延髓与其他形式的MG相比会有更高的风险。疾病的发作往往在早期，大多数病人在30-40岁出现症状。检测MuSK抗体非常有助于诊断和临床管理MG病人。
musk试剂盒检测原理
musk试剂盒是利用固相酶联免疫吸附检测试验（ELISA）。包被孔中包被了抗原。病人样本中的抗体连结到包被孔中的抗原，并通过信号放大系统检测出来。显色反应是通过结合到抗体的碱性磷酸酶催化的。生成的颜色强度与样本中相应抗体浓度成正比关系。定性或者定量结果分别通过临界质控或者标准曲线得到。
musk试剂盒组成成分
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名称 |
数量 |
成分 |
| 微孔板 | 12×8 | 包被有高度纯化的重组MuSK蛋白 |
| 酶联物 | 1×0.25ml |
含碱性磷酸酶标记的特异性抗体 |
| 抗血清 | 1×13ml |
含抗人免疫球蛋白、稳定剂 |
| 标准品A~E | 5×12ml |
即用型 浓度0、0.4、2.5、5、12U/ml |
| 阳性质控 | 1×1.2ml |
红色 即用型 |
| 阴性质控 | 1×1.2ml |
绿色 即用型 |
| 分析缓冲液 | 1×120ml |
红色 即用型 |
| 洗涤液 | 1×100ml |
10倍浓缩 |
| 底物液 | 1×13ml |
即用型 |
| 终止液 | 1×15ml |
含1M NaOH、0.25M EDTA |
需要的材料（未提供）
1) 移液器，体积5、10、20、50、100、1000μL
2) 一次性的玻璃管(12×75 mm)
3) 聚丙烯（PP）管（例如Sarstedt）
4) 旋涡混合器
5) 温育箱，37℃
6) 8通道的移液器，带加样槽
7) 洗瓶、自动或者半自动洗板机
8) 酶标仪
9) 双蒸水或去离子水
10) 吸水纸、吸嘴和秒表
储存条件
musk试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。
样本要求
血清
遵从静脉穿刺采集全血的常规注意事项。从采集血液样品的那一刻起到检测时都应保持血液样品的化学整体性。不要使用明显溶血、黄疸血和脂血样品。如果样品出现混浊，则在实验前应当离心以除去所有的微粒物质。
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保存 |
2-8℃ |
≤ -20℃（分装） |
避免热源或太阳直射，避免反复冻融 |
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稳定性 |
7天 |
6个月 |
检测方法
冻干或者浓缩成分的制备
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体积 |
成分 |
稀释液 |
比例 |
备注 |
保存 |
稳定性 |
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20ml |
浓缩洗涤液 |
180 mL |
双蒸水 |
1:10 |
充分混匀 |
2-8℃ |
4周 |
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40 μL |
酶联物 |
4 mL |
分析缓冲液 |
1:101 |
混匀，避免气泡 |
2-8℃ |
48小时 |
样本的稀释
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病人样本 |
稀释 |
稀释液 |
比例 |
备注 |
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血清 |
常规 |
分析缓冲液 |
1:101 |
例如：10μL血清样本+1000μL分析缓冲液 |
musk试剂盒检测步骤
1、移取100μL的标准品、质控品和稀释的病人样本至相应的微孔中，盖板
2、在定轨摇床上（500rpm）室温（18-25℃）温育60分钟
3、弃去孔中溶液。使用稀释的洗涤液每次250μL洗板3次，在吸水纸上拍干
4、每孔加入100μL抗血清，盖板
5、在定轨摇床上（500rpm）室温（18-25℃）温育60分钟
6、弃去孔中溶液。使用稀释的洗涤液每次250μL洗板3次，在吸水纸上拍干
7、每孔加入100μL已稀释的酶联物，盖板
8、在定轨摇床上（500rpm）室温（18-25℃）温育60分钟
9、弃去孔中溶液。使用稀释的洗涤液每次250μL洗板3次。在吸水纸上拍干
10、加底物液和终止液建议使用8通道移液器。移取底物液和终止液应该为相同的时间间隔。避免气泡的生成
11、每孔加入100μLPNPP底物液。轻轻摇动酶标板混匀溶液
12、在室温（18-25℃）温育30分钟
13、每孔加入100μL PNPP终止液终止显色反应。轻轻摇动酶标板混匀溶液
14、在405nm处检测吸光度（参考波长为600—650nm），应在加入终止液后60分钟内读数
结果计算
质量控制
该实验结果只有在按照说明书操作才有效。此外，使用者必须严格按照GLP规范或者其他适合的准则/法律。所有的试剂盒质控品必须在标签和QC证书的可接受范围内。如果不符合该条件，则实验无效并需要重做。每个实验室应使用已知的样本作为进一步的质控。建议进行适当的质量评价试验。
如果有任何的偏差，以下的技术问题应给予证实：试剂的有效期、保存条件、移液器、设备、温育条件和洗涤方法。
定性评价
标准品B（临界标准品）的吸光度为临界值（CO）。通过样本的平均吸光度比临界值可以计算临界指数（COI），样本的吸光度更高的为阳性，样本吸光度低的为阴性。
例如：
临界值（标准品B吸光度）=0.23
样本OD值=0.7
临界指数（COI）：0.70/0.23=3.04。样本应被认为是阳性。
定量评价
以标准品的OD值为Y轴（线性），相应的浓度为X轴（对数）在半对数坐标纸或者自动分析软件上作出标准曲线，使用三次样条函数、4参数或者Logit-Log可以得到良好的拟合度。
计算标准曲线应该使用每个标准品的OD值（在重复检测中一个明显的异常值应忽略而采用一个更可靠的单值）。